Plásmido Doble Nickase (m) TAP1: sc-423265-NIC

Mouse Tap1 codifica el transportador asociado al procesamiento de antígenos 1 (TAP1), una subunidad de la familia de transportadores ABC con unión a ATP que forma un heterodímero con TAP2 para translocar péptidos derivados del proteasoma desde el citosol hacia el retículo endoplásmico. Este aporte de péptidos es necesario para la carga peptídica en moléculas del MHC de clase I y la posterior presentación de antígenos a linfocitos T CD8+, lo que vincula a TAP1 con vías centrales de vigilancia inmunitaria adaptativa. La actividad de TAP1 se entrecruza con la señalización inflamatoria inducida por interferón, el control de calidad del RE y el eje inmunoproteasoma–MHC I que da forma al inmunopeptidoma celular. Las alteraciones en la función de TAP1 se asocian con una expresión superficial disminuida de MHC I y fenotipos de evasión inmunitaria en modelos relevantes para enfermedad, lo que respalda estudios mecanísticos en contextos de inmunología, infección y biología tumoral.

TAP1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tap1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tap1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tap1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tap1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.