Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO TAP (m): sc-424683
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- TAP Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique TAP, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TAP Antibody (53H8): sc-32319
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO TAP (m) | sc-424683 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin Nxf1 code TAP, un récepteur d’export d’ARN conservé se liant à l’ARN, qui s’associe à NXT1 pour assurer le transport de masse des ARNm du noyau vers le cytoplasme à travers le complexe du pore nucléaire. TAP reconnaît les particules ribonucléoprotéiques messagères matures via des interactions avec des complexes adaptateurs tels que TREX, et contribue au couplage entre transcription, épissage et maturation de l’extrémité 3′ avec l’export nucléaire. En contrôlant la disponibilité des transcrits pour la traduction, Nxf1 influence la protéostase, la progression du cycle cellulaire et les programmes d’expression génique en réponse au stress. Les perturbations de la machinerie d’export des ARNm sont associées à une expression génique dérégulée en oncologie ainsi qu’à des mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, faisant de Nxf1 un nœud utile pour étudier les pathologies liées au métabolisme de l’ARN.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TAP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nxf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nxf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nxf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TAP.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nxf1 pour l'étude de la signalisation de TAP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Nxf1 essentiels à la fonction de TAP
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nxf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le TAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nxf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le TAP plasmide HDR (m) et le TAP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nxf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nxf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.