Plasmide CRISPR d'Activation (h) TANK: sc-402464-ACT

TANK (activateurr de NF-κB associé aux membres de la famille TRAF) est une protéine adaptatrice et d’échafaudage cytosolique qui coordonne la transduction du signal en aval des récepteurs de l’immunité innée et de l’inflammation. Elle interagit avec des protéines TRAF et des kinases telles que TBK1 et les complexes IKK afin de moduler la transcription dépendante de NF-κB et des IRF, influençant les réponses à l’interféron, la production de cytokines et les programmes de survie cellulaire. Par ces connexions de voies de signalisation, TANK contribue à la régulation de la défense antivirale et de l’homéostasie inflammatoire, et sa dérégulation est pertinente pour l’étude des déséquilibres de signalisation immunitaire et des mécanismes de maladies associées à l’inflammation. Dans les cellules humaines, une activité altérée des réseaux dépendants de TANK peut être exploitée pour analyser les interactions croisées entre NF-κB, la signalisation de l’interféron de type I et les voies de réponse au stress.

TANK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TANK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TANK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TANK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TANK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TANK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TANK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TANK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TANK dans les cellules tumorales présentant une expression de TANK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.