Plasmide CRISPR/Cas9 KO TALK-1 (h): sc-406360

Présentation

KCNK16 code TALK-1 (K2P16.1), un canal potassique à deux domaines « deux pores » (K2P) qui contribue à la conductance de fond du K⁺ et détermine le potentiel de membrane au repos dans les cellules excitables et sécrétoires. En régulant l’excitabilité membranaire, TALK-1 influence l’entrée de Ca²⁺ dépendante du voltage ainsi que les voies de signalisation en aval couplées au Ca²⁺, qui façonnent le couplage stimulus–sécrétion et les réponses cellulaires au stress. Le canal est enrichi dans les îlots pancréatiques, où des flux de K⁺ altérés peuvent moduler l’activité électrique des cellules β et la dynamique de libération d’insuline. Des études génétiques et fonctionnelles ont associé l’activité de KCNK16/TALK-1 à des traits métaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour la recherche mécanistique sur la signalisation associée au diabète et la physiologie des canaux ioniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TALK-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KCNK16 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KCNK16, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KCNK16 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TALK-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KCNK16 pour l'étude de la signalisation de TALK-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KCNK16 essentiels à la fonction de TALK-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KCNK16 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TALK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TALK-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KCNK16. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TALK-1 plasmide HDR (h) et le TALK-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KCNK16 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KCNK16 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.