Particules Lentivirales d'Activation (m2) Tak1: sc-424044-LAC-2

Le gène murin Map3k7 code TAK1 (TGF-β–activated kinase 1), une MAP3K qui intègre les signaux provenant des récepteurs du TGF-β/BMP, des membres de la superfamille des récepteurs du TNF, des récepteurs de type Toll et des complexes du récepteur de l’IL-1 afin d’activer en aval les cascades NF-κB et MAPK (JNK, p38 et ERK). Par la phosphorylation des MAP2K et du complexe IKK via des adaptateurs TAB, TAK1 régule la signalisation inflammatoire et de l’immunité innée, les réponses au stress, les choix apoptose/survie et l’homéostasie tissulaire dans de nombreux types cellulaires. Une signalisation TAK1 dérégulée est associée à une production aberrante de cytokines, à une altération de l’intégrité des barrières et à un remodelage pathologique dans des modèles de maladies inflammatoires, d’auto-immunité et de réseaux de signalisation liés au cancer. L’édition génique ciblant Map3k7 permet une dissection mécanistique de la signalisation proximale aux récepteurs, des interactions entre voies et de phénotypes spécifiques de certains types cellulaires, au moyen de stratégies de knockout/knockin, d’étiquetage par épitope ou de perturbation du domaine kinase dans des cellules murines et dans des systèmes in vivo.

Les particules d'activation lentivirales Tak1 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Map3k7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Tak1 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Map3k7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Tak1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Map3k7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.