Tafazzin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-426211-ACT

O gene Taz de camundongo codifica a tafazzina, uma transacilase associada à membrana interna mitocondrial que remodela a cardiolipina e outros fosfolipídios para estabelecer uma composição madura das cadeias acila. Essa remodelação lipídica é central para a eficiência da fosforilação oxidativa, a organização das cristas mitocondriais e a regulação da dinâmica mitocondrial e da mitofagia sob estresse energético. A atividade de tafazzina comprometida altera a homeostase da cardiolipina, levando a prejuízo na função da cadeia transportadora de elétrons e a maior suscetibilidade ao estresse metabólico, tornando o Taz um nó-chave nas vias de controle de qualidade mitocondrial. Na pesquisa biomédica, o Taz é frequentemente estudado no contexto do metabolismo lipídico mitocondrial, da bioenergética e da sinalização dependente de cardiolipina, relevantes para fenótipos neuromusculares e cardíacos.

Tafazzin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Taz sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Tafazzin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Taz em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Taz, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Tafazzin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Taz nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Tafazzin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Tafazzin em células tumorais com expressão de Taz silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.