Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tachykinin: sc-400690-ACT

TAC1 code des peptides précurseurs des tachykinines, qui sont transformés en ligands neuroactifs tels que la substance P et la neurokinine A. Ces ligands signalent principalement via les récepteurs des neurokinines afin de réguler la neurotransmission, la nociception, l’inflammation neurogène et le tonus des muscles lisses. La signalisation des tachykinines mobilise des voies de récepteurs couplés aux protéines G, notamment la voie phospholipase C/IP3–flux de Ca²⁺, l’activation de la PKC et les cascades MAPK/ERK, influençant la libération de cytokines et l’excitabilité neuronale. Dans les tissus humains, l’expression de TAC1 est enrichie dans les neurones sensoriels ainsi que dans certains contextes neuroendocriniens et immunitaires, ce qui l’associe aux circuits inflammatoires et au dialogue neuro-immunitaire. Des dérégulations des voies des tachykinines ont été associées dans la littérature à des états de douleur chronique, à l’hyperréactivité des voies aériennes, à des troubles de la motilité gastro-intestinale et à des processus neuro-inflammatoires, étayant des études mécanistiques de la modulation de ces voies.

Tachykinin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TAC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tachykinin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TAC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TAC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tachykinin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TAC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tachykinin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tachykinin dans les cellules tumorales présentant une expression de TAC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.