TACE/ADAM17 Double Nickase Plasmid (h): sc-400827-NIC

ADAM17, auch als TACE bekannt, ist eine membranverankerte Metalloprotease, die das „Shedding“ (Abspaltung) von Ektodomänen zahlreicher Zelloberflächenproteine katalysiert, darunter TNF, EGFR-Liganden (z. B. TGF-α und Amphiregulin) sowie mehrere Adhäsionsmoleküle und Rezeptoren. Durch diese proteolytische Prozessierung prägt TACE/ADAM17 inflammatorische Signalwege, die Aktivierung der EGFR/MAPK-Kaskade und die Zell‑Zell‑Kommunikation und beeinflusst damit Proliferation, Überleben und die Rekrutierung von Immunzellen. Die ADAM17-Aktivität wird streng reguliert – durch Reifung im sekretorischen Weg und durch Trafficking an der Plasmamembran – und ist an koordinierten Antworten auf Zytokine, Stress und Wachstumsfaktoren beteiligt. Eine dysregulierte, ADAM17-abhängige Abspaltung wird mit chronischen Entzündungen, krebsassoziierter Signalgebung, kardiovaskulärem Remodeling und neuroinflammatorischen Prozessen in Verbindung gebracht, weshalb ADAM17 häufig Ziel mechanistischer Studien zur Rezeptor-/Ligandenverfügbarkeit und zur Dynamik nachgeschalteter Signalwege ist.

TACE/ADAM17 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADAM17-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADAM17 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADAM17-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADAM17-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.