Plasmide CRISPR d'Activation (h) TAB3: sc-404049-ACT

La protéine humaine TAB3 (TAK1-binding protein 3) est un composant d’échafaudage et de régulation du module de signalisation TAB/TAK1, qui relie des signaux provenant de récepteurs en amont ainsi que des stimuli de stress à l’activation des voies NF-κB et MAPK. En coordonnant l’assemblage de complexes kinasiques en aval des voies de reconnaissance des motifs (pattern-recognition) et de signalisation des cytokines, TAB3 contribue à façonner des programmes transcriptionnels qui contrôlent les réponses inflammatoires, la survie cellulaire et l’adaptation au stress. Une dérégulation de la signalisation au sein des réseaux dépendants de TAK1 a été impliquée dans l’inflammation chronique et dans des contextes de signalisation oncogénique, ce qui rend TAB3 pertinent pour disséquer l’architecture des voies et leurs mécanismes de rétrocontrôle. L’expression et la fonction de TAB3 sont donc fréquemment examinées dans des études portant sur la signalisation de l’immunité innée, les interactions entre voies de transduction du signal et la régulation transcriptionnelle dépendante des stimuli.

TAB3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TAB3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TAB3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TAB3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TAB3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TAB3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TAB3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TAB3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TAB3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TAB3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.