Particules Lentivirales d'Activation (h) T1R2: sc-402555-LAC

TAS1R2 code la sous-unité T1R2 du récepteur humain du goût sucré, un GPCR de classe C qui forme un hétérodimère avec T1R3 pour détecter les sucres et les édulcorants. Au-delà de la gustation orale, T1R2 est exprimé dans des tissus extra-oraux tels que l’épithélium gastro-intestinal et le pancréas, où il contribue à la détection des nutriments et s’interface avec la signalisation des GPCR, modulant la dynamique du calcium intracellulaire et des processus dépendants de l’AMPc. Par ces voies, T1R2 peut influencer la sécrétion et des réponses métaboliques liées à la gestion du glucose et à la signalisation entéro-endocrine. Des altérations de l’expression de TAS1R2 ou de la fonction du récepteur ont été étudiées dans le contexte de phénotypes métaboliques, notamment l’obésité et des traits associés au diabète, ainsi que dans une biologie chimiosensorielle plus large et celle de l’axe intestin–cerveau.

Les particules d'activation lentivirales T1R2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TAS1R2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales T1R2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TAS1R2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de T1R2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TAS1R2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.