Plasmide CRISPR/Cas9 KO T1R2 (h): sc-402555

Présentation

TAS1R2 code pour la sous-unité du récepteur du goût sucré T1R2, un RCPG (GPCR) de classe C qui forme un hétérodimère avec T1R3 pour détecter les sucres et les édulcorants et coupler la liaison du ligand à une signalisation intracellulaire via des seconds messagers. Au-delà des cellules gustatives, une signalisation T1R2/T1R3 a été décrite dans des cellules entéroendocrines et dans d’autres contextes chimiosensoriels, où elle peut influencer la détection des nutriments et les réponses hormonales ou métaboliques en aval. L’activation du récepteur est généralement associée à des voies médiées par les RCPG impliquant des protéines G, PLCβ2, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire, ainsi que des programmes MAPK ou transcriptionnels en aval selon le type cellulaire. Des altérations de l’expression de TAS1R2 ou certaines variantes ont été étudiées en lien avec des phénotypes métaboliques, le comportement alimentaire et l’homéostasie du glucose, ce qui souligne sa pertinence pour l’étude des réseaux de signalisation sensibles aux nutriments.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO T1R2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TAS1R2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TAS1R2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TAS1R2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine T1R2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TAS1R2 pour l'étude de la signalisation de T1R2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TAS1R2 essentiels à la fonction de T1R2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TAS1R2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le T1R2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le T1R2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TAS1R2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le T1R2 plasmide HDR (h) et le T1R2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TAS1R2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TAS1R2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.