Plasmide CRISPR/Cas9 KO T-type Ca⁺⁺ CP α1H (h): sc-401147

Présentation

CACNA1H code la sous-unité α1H formant le pore du canal calcique de type T CaV3.2, qui assure une entrée de Ca2+ activée à faible voltage et façonne l’excitabilité membranaire, l’activité pacemaker et la régulation de l’expression génique dépendante du calcium. En contrôlant les oscillations sous-liminaires et les transitoires intracellulaires de Ca2+, CaV3.2 s’intègre à des processus de signalisation qui influencent la libération de neurotransmetteurs, la sécrétion hormonale et des programmes transcriptionnels dépendants de l’activité. Une altération de la fonction de CACNA1H a été impliquée dans des troubles de l’excitabilité, notamment une susceptibilité à l’épilepsie, des mécanismes de douleur neuropathique et des phénotypes de rythme cardiaque, et elle est également étudiée dans des contextes de prolifération et de survie des cellules cancéreuses. En tant que canal ionique nodal au sein des réseaux de signalisation excitatrice, CACNA1H est fréquemment interrogé pour disséquer les voies dépendantes de l’entrée de calcium et le remodelage du « channelome ».

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO T-type Ca++ CP α1H (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CACNA1H dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CACNA1H, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CACNA1H à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine T-type Ca++ CP α1H.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CACNA1H pour l'étude de la signalisation de T-type Ca++ CP α1H, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CACNA1H essentiels à la fonction de T-type Ca++ CP α1H
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CACNA1H pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le T-type Ca++ CP α1H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le T-type Ca++ CP α1H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CACNA1H. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le T-type Ca++ CP α1H plasmide HDR (h) et le T-type Ca++ CP α1H (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CACNA1H pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CACNA1H définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.