Plásmido CRISPR de Activación (h) T-type Ca⁺⁺ CP α1G: sc-418331-ACT

CACNA1G codifica la subunidad α1G formadora del poro del canal de Ca++ tipo T Cav3.1, una conductancia activada a bajo voltaje que sostiene corrientes de ventana y la despolarización rítmica de la membrana. Al modular los transitorios de calcio intracelular cerca de los potenciales de reposo, Cav3.1 influye en la excitabilidad neuronal, el marcapasos y las cascadas de señalización dependientes de calcio que acoplan la actividad de membrana a la regulación génica y la función sináptica. La actividad de CACNA1G se integra con redes más amplias de homeostasis del Ca2+ y vías de excitabilidad, incluidas quinasas dependientes de calcio y programas transcripcionales sensibles al potencial de membrana. La disfunción de los canales de calcio tipo T se ha asociado en la literatura con alteraciones de las oscilaciones tálamo-corticales y fenotipos de excitabilidad relevantes para mecanismos de enfermedad neurológica y neuropsiquiátrica.

T-type Ca++ CP α1G El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CACNA1G sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

T-type Ca++ CP α1G El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CACNA1G en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CACNA1G, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de T-type Ca++ CP α1G. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CACNA1G y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de T-type Ca++ CP α1G en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía T-type Ca++ CP α1G en células tumorales con expresión de CACNA1G silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.