T-FABP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423411

Übersicht

Fabp9 kodiert das testikuläre Fettsäure-bindende Protein (T-FABP), ein Lipid-Chaperon, das am intrazellulären Transport langkettiger Fettsäuren und anderer hydrophober Liganden in der männlichen Keimbahn beteiligt ist. Durch die Regulation von Fettsäureaufnahme, -sequestrierung und -bereitstellung für metabolische Enzyme und Membranen ist T-FABP mit Signal- und Regulationswegen der Lipidhomöostase verknüpft, die während der Spermatogenese die mitochondriale β‑Oxidation, Membranremodellierung und das Redoxgleichgewicht beeinflussen. Eine veränderte Aktivität der FABP-Proteinfamilie wird allgemein mit metabolischer Dysregulation und entzündlicher Signalübertragung in Verbindung gebracht; Fabp9 wird häufig im Kontext von Spermienentwicklung, Motilität und fertilitätsbezogenen Phänotypen untersucht. In Mausmodellen stellt Fabp9 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um zu klären, wie der Lipidstoffwechsel in Keimzellen die Reproduktionsbiologie und die stressabhängige metabolische Anpassung beeinflusst.

Das T-FABP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fabp9-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fabp9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fabp9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die T-FABP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fabp9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der T-FABP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fabp9-Exone abzielen, die für die T-FABP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fabp9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom T-FABP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom T-FABP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fabp9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das T-FABP HDR-Plasmid (m) und T-FABP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fabp9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fabp9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.