Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tβ-4: sc-417057-ACT

La thymosine bêta-4, codée par le gène humain TMSB4X, est un peptide hautement conservé qui séquestre l’actine et régule la disponibilité de la G-actine, tout en favorisant le remodelage du cytosquelette, la motilité cellulaire et les changements de forme cellulaire induits par le stress. En modulant la dynamique de l’actine, elle influence des processus tels que la migration, l’adhérence et les réponses cellulaires associées à la cicatrisation, et a été reliée à des voies de signalisation contrôlant l’inflammation et le remodelage tissulaire. Des altérations de l’expression de TMSB4X ont été rapportées dans divers contextes, notamment la progression tumorale, la signalisation angiogénique et des états fibreux ou inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de phénotypes dépendants du cytosquelette. En tant que régulateur du cytosquelette largement exprimé, TMSB4X constitue une cible accessible pour examiner comment l’homéostasie de l’actine s’articule avec les programmes transcriptionnels et les signaux du microenvironnement cellulaire.

Tβ-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMSB4X sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tβ-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMSB4X dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMSB4X, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tβ-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMSB4X natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tβ-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tβ-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMSB4X silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.