Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-10 (m): sc-422496
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Tβ-10 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Tβ-10, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Tβ-10 Antibody (D-6): sc-514309
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-10 (m) | sc-422496 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Tmsb10 code la thymosine bêta-10 (Tβ-10), une petite protéine séquestrant l’actine qui régule l’équilibre entre actine G et actine F et favorise un remodelage rapide du cytosquelette. En modulant la dynamique de polymérisation de l’actine, Tβ-10 contribue à des processus tels que le contrôle de la forme cellulaire, la migration, l’adhésion et la cytocinèse, avec des effets en aval sur des programmes de signalisation liés à la motilité et aux réponses au stress. Une expression altérée de TMSB10/Tβ-10 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, corrélant fréquemment avec des modifications de la prolifération et du comportement invasif. Dans les systèmes murins, Tmsb10 constitue donc un point d’entrée utile pour disséquer les phénotypes cellulaires dépendants de l’actine et leur relation avec des voies associées à la transformation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-10 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tmsb10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tmsb10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tmsb10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tβ-10.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tmsb10 pour l'étude de la signalisation de Tβ-10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tmsb10 essentiels à la fonction de Tβ-10
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tmsb10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Tβ-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Tβ-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tmsb10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Tβ-10 plasmide HDR (m) et le Tβ-10 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tmsb10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tmsb10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.