Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-10 (h): sc-407294

Présentation

TMSB10 code la thymosine bêta-10 (Tβ-10), une petite protéine séquestrant l’actine qui régule la disponibilité de la G-actine et influence ainsi la dynamique des filaments d’actine, la forme cellulaire et la motilité. En modulant le remodelage du cytosquelette, Tβ-10 affecte des processus tels que la progression du cycle cellulaire, l’adhésion et les réponses au stress, avec des effets en aval sur des réseaux de signalisation liés à la migration et à la survie. Des altérations de l’expression de TMSB10 ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, notamment en cancérologie et dans des états inflammatoires, où des changements dans l’organisation de l’actine peuvent contribuer à l’invasion, à des phénotypes associés à l’angiogenèse et au remodelage tissulaire. Par conséquent, TMSB10 est fréquemment étudié dans des voies reliant la régulation du cytosquelette à des programmes transcriptionnels et à des transitions d’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tβ-10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMSB10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMSB10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMSB10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tβ-10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMSB10 pour l'étude de la signalisation de Tβ-10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMSB10 essentiels à la fonction de Tβ-10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMSB10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Tβ-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Tβ-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMSB10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Tβ-10 plasmide HDR (h) et le Tβ-10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMSB10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMSB10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.