Plásmido CRISPR de Activación (h) SYP/Synaptophysin: sc-400487-ACT

SYP codifica la sinaptofisina, una glucoproteína integral de membrana abundante en las vesículas sinápticas que favorece la biogénesis vesicular, el tráfico y la liberación de neurotransmisores mediante exocitosis regulada. Participa en procesos del ciclo de vesículas presinápticas, incluidos la endocitosis, el acoplamiento (docking) y la fusión de vesículas, y se utiliza habitualmente como marcador de densidad sináptica y de diferenciación neuronal. Las vías asociadas a la sinaptofisina se entrecruzan con la transmisión sináptica dependiente de calcio y con la remodelación de circuitos neuronales dependiente de la actividad. Se han descrito alteraciones en la expresión de SYP en trastornos neurodegenerativos y del neurodesarrollo, y con frecuencia se evalúa en estudios de neuropatología como indicador de la integridad sináptica.

SYP/Synaptophysin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SYP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SYP/Synaptophysin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SYP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SYP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SYP/Synaptophysin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SYP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SYP/Synaptophysin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SYP/Synaptophysin en células tumorales con expresión de SYP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.