Plasmide CRISPR d'Activation (h) Syntaxin 17: sc-403251-ACT

STX17 code la syntaxine 17, une protéine de la famille des SNARE localisée au réticulum endoplasmique et aux membranes associées aux mitochondries, et qui soutient des événements de fusion membranaire essentiels à l’homéostasie cellulaire. La syntaxine 17 est un médiateur clé de la fusion autophagosome–lysosome, coordonnant les étapes tardives de l’autophagie et de la mitophagie avec l’acheminement des cargos vers les compartiments de dégradation. Par son rôle dans le trafic vésiculaire et le contrôle qualité des organites, STX17 influence la protéostase, l’adaptation au stress et des voies de signalisation métaboliques en interaction avec la fonction mitochondriale. La dérégulation des voies d’autophagie et d’élimination mitochondriale auxquelles participe la syntaxine 17 est largement impliquée dans la neurodégénérescence, la biologie des infections et des phénotypes de stress cellulaire associés au cancer, ce qui motive des études mécanistiques sur le contrôle de l’expression de STX17.

Syntaxin 17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STX17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Syntaxin 17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STX17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STX17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Syntaxin 17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STX17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Syntaxin 17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Syntaxin 17 dans les cellules tumorales présentant une expression de STX17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.