Synoviolin Double Nickase Plasmid (h): sc-403476-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Synoviolin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Synoviolin Double-Nickase-Plasmid (h) und Synoviolin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SYVN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Synoviolin: sc-293484
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Synoviolin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403476-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Synoviolin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403476-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYVN1 kodiert Synoviolin, eine im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisierte RING-Typ‑E3‑Ubiquitin-Ligase, die an der ER-assoziierten Degradation (ERAD) beteiligt ist, indem sie fehlgefaltete oder überschüssige Proteine ubiquitiert und so deren proteasomalen Abbau ermöglicht. Durch die Modulation der ubiquitinabhängigen Proteinkontrolle beeinflusst Synoviolin die ER-Proteostase, zelluläre Stressantworten und entzündliche Signalnetzwerke. Eine veränderte SYVN1-Aktivität wurde mit einer gestörten Bewältigung von ER-Stress und einer aberranten Protein-Homöostase in Zusammenhängen wie synovialer Hyperplasie und anderen entzündungsassoziierten Pathologien in Verbindung gebracht. Als Regulator von Ubiquitinierung und ERAD wird SYVN1 häufig in Mechanismen untersucht, die Proteostase mit Zellüberleben, Immunsignalgebung und Gewebeumbau verknüpfen.
Synoviolin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SYVN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SYVN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SYVN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SYVN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.