Plasmide CRISPR/Cas9 KO Synoviolin (h): sc-403476

Présentation

Le gène humain **SYVN1** code la synovioline, une ligase E3 de l’ubiquitine de type RING résidente du réticulum endoplasmique (RE), qui agit comme composant central de la dégradation associée au RE (ERAD) en ubiquitinylant les protéines mal repliées et en favorisant leur élimination par le protéasome. En assurant le contrôle qualité des protéines du RE, la synovioline contribue au maintien de la protéostasie et module la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), reliant le stress du RE à des voies inflammatoires et de survie en aval. L’activité de SYVN1 a également été associée à la régulation de l’apoptose et du contrôle du cycle cellulaire via le renouvellement, dépendant de l’ubiquitine, de substrats clés, influençant l’adaptation cellulaire au stress chronique. Une expression dérégulée de SYVN1 ou une capacité ERAD altérée est impliquée dans des mécanismes pathologiques, notamment l’hyperplasie synoviale et les atteintes articulaires inflammatoires, ainsi que, plus largement, dans des contextes de déséquilibre de la protéostasie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Synoviolin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SYVN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SYVN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SYVN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Synoviolin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SYVN1 pour l'étude de la signalisation de Synoviolin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SYVN1 essentiels à la fonction de Synoviolin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SYVN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Synoviolin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Synoviolin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SYVN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Synoviolin plasmide HDR (h) et le Synoviolin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SYVN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SYVN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.