Plasmide CRISPR d'Activation (h) Synaptotagmin XI: sc-404323-ACT

SYT11 code la synaptotagmine XI humaine, un membre de la famille des synaptotagmines impliqué dans la régulation du trafic membranaire intracellulaire et de la dynamique des vésicules. La synaptotagmine XI a été associée au contrôle de l’exocytose et du recyclage endocytaire, influençant le renouvellement des vésicules synaptiques ainsi que, plus largement, des processus de la voie sécrétoire dans les neurones et d’autres types cellulaires sécrétoires. Par ses effets sur l’arrimage des vésicules, leur compétence à la fusion et l’homéostasie des organites, SYT11 peut interagir avec des voies régissant la neurotransmission, la fonction autophagie-lysosome et les réponses cellulaires au stress. Une expression modifiée de SYT11 ou des variations génétiques ont été associées à des contextes de recherche sur la neurodégénérescence et la neuroinflammation, ce qui étaye son utilisation dans des études sur la vulnérabilité neuronale et les mécanismes de dysfonctionnement synaptique.

Synaptotagmin XI Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SYT11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Synaptotagmin XI Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SYT11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SYT11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Synaptotagmin XI. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SYT11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Synaptotagmin XI au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Synaptotagmin XI dans les cellules tumorales présentant une expression de SYT11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.