Plásmido Doble Nickase (h) Syk: sc-400189-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Syk consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Syk (h) y el plásmido de doble nickasa Syk (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SYK. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Syk Anticuerpo (4D10): sc-1240
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Syk | sc-400189-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Syk | sc-400189-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYK codifica Syk, una tirosina cinasa citosólica no receptora que acopla la señalización de inmunorreceptores con vías efectoras aguas abajo en células hematopoyéticas. Tras la activación de receptores que contienen ITAM, como el receptor de células B y los receptores Fc, Syk fosforila proteínas adaptadoras y enzimas para propagar la señalización a través de PLCγ, PI3K–AKT, MAPK/ERK y NF-κB, modulando el flujo de calcio, los programas transcripcionales, la proliferación y las respuestas de citocinas. Más allá de la activación inmunitaria, Syk contribuye a la fagocitosis mediada por FcR, a contextos de señalización relacionados con el inflamasoma y a la remodelación del citoesqueleto mediante vías asociadas a integrinas. La desregulación de la señalización de SYK se ha implicado en la activación aberrante de células B y en circuitos inflamatorios, por lo que es un objetivo frecuente en estudios de redes de señalización inmunitaria y de mecanismos de enfermedades hematológicas.
Syk El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SYK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SYK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SYK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SYK alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.