Plasmide CRISPR/Cas9 KO Svs6 (m): sc-423228

Présentation

Le gène murin **Svs6** code la **protéine sécrétoire 6 des vésicules séminales**, une protéine du tractus reproducteur mâle qui contribue à la composition et aux propriétés biophysiques du liquide séminal. **Svs6** fait partie du programme sécrétoire des vésicules séminales répondant aux androgènes et est couramment utilisé comme marqueur de la différenciation des glandes annexes et de l’activité sécrétoire luminale. En modulant le milieu du plasma séminal, **Svs6** intervient dans des processus qui influencent la survie et la motilité des spermatozoïdes, ainsi que les interactions post-éjaculatoires au sein du tractus reproducteur. Les variations d’expression des protéines sécrétoires des vésicules séminales sont fréquemment étudiées dans des modèles de perturbation endocrinienne, d’inflammation et de phénotypes reproducteurs, ce qui confirme l’intérêt de **Svs6** pour des études à l’échelle des voies impliquées dans la fertilité masculine et la biologie des glandes annexes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Svs6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Svs6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Svs6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Svs6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Svs6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Svs6 pour l'étude de la signalisation de Svs6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Svs6 essentiels à la fonction de Svs6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Svs6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Svs6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Svs6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Svs6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Svs6 plasmide HDR (m) et le Svs6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Svs6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Svs6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.