Plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-6 (m): sc-423223

Présentation

Surf6 code SURF-6, une protéine nucléolaire conservée impliquée dans la biogenèse des ribosomes et l’homéostasie nucléolaire, notamment via des rôles dans le traitement du pré‑ARNr et la maturation des sous-unités ribosomiques. SURF-6 participe à des processus de liaison à l’ARN et d’organisation du nucléole qui coordonnent la capacité de synthèse protéique avec les programmes de croissance et de prolifération cellulaires. La perturbation de la fonction nucléolaire et de la production des ribosomes est étroitement liée aux réponses au stress cellulaire, à des altérations de la traduction et à des défauts de prolifération, ce qui fait de Surf6 un gène pertinent pour l’étude de la stabilité du génome et du contrôle de la croissance dans les systèmes mammifères. Dans des modèles murins, la perturbation de Surf6 constitue un point d’entrée exploitable pour examiner comment la biogenèse ribosomique s’articule avec des phénotypes du développement et la dérégulation, associée aux maladies, des voies nucléolaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SURF-6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Surf6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Surf6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Surf6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SURF-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Surf6 pour l'étude de la signalisation de SURF-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Surf6 essentiels à la fonction de SURF-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Surf6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SURF-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SURF-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Surf6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SURF-6 plasmide HDR (m) et le SURF-6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Surf6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Surf6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.