SUR-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423218

Descripción general

Abcc9 codifica el receptor de sulfonilurea 2 (SUR-2), una subunidad reguladora de los canales de potasio sensibles a ATP (KATP) que acopla el estado metabólico celular con la excitabilidad de la membrana al controlar la compuerta de los canales Kir6.x. En el ratón, los canales KATP que contienen SUR-2 son prominentes en el músculo cardíaco y el músculo liso vascular, donde determinan la duración del potencial de acción, el manejo del calcio y el tono vascular en respuesta a cambios en la señalización de ATP/ADP y de fosfolípidos. A través de estas funciones, ABCC9 integra señales bioenergéticas con vías adaptativas al estrés, como el preacondicionamiento isquémico, los programas de contractilidad del músculo liso y la función mitocondrial. La desregulación de la actividad de ABCC9/de los canales KATP se ha vinculado a fenotipos cardiovasculares y metabólicos, y variantes humanas de ABCC9 se asocian con síndromes de canalopatía que afectan al corazón y la vasculatura, lo que convierte a Abcc9 en una diana relevante para el modelado mecanístico de enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SUR-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Abcc9 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Abcc9 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Abcc9 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SUR-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Abcc9 para la investigación de la señalización de SUR-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Abcc9 críticos para la función de SUR-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Abcc9 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SUR-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SUR-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Abcc9. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SUR-2 (m) y el plásmido HDR SUR-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Abcc9 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Abcc9 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.