Plasmide Double Nickase (m) Superoxide Dismutase 1/SOD1: sc-423069-NIC

Le gène murin *Sod1* code la superoxyde dismutase 1 (SOD1), une enzyme antioxydante cytosolique dépendante du Cu/Zn qui catalyse la dismutation des radicaux superoxydes en peroxyde d’hydrogène et en oxygène, limitant ainsi les dommages oxydatifs aux protéines, aux lipides et aux acides nucléiques. L’activité de SOD1 s’inscrit dans les voies de l’homéostasie rédox cellulaire, notamment les systèmes du glutathion et de la catalase/peroxyrédoxine, et influence la fonction mitochondriale, la protéostase et la signalisation inflammatoire en situation de stress oxydatif. Le dérèglement de la fonction de SOD1 ou son agrégation a été largement étudié dans le contexte des maladies neurodégénératives et de la vulnérabilité des motoneurones ; une expression altérée de *Sod1* est également utilisée pour modéliser les lésions oxydatives liées au vieillissement, au stress métabolique et à l’exposition à des toxiques. Par conséquent, *Sod1* constitue une cible fréquente pour des études mécanistiques portant sur la gestion des espèces réactives de l’oxygène (ROS), la signalisation de la réponse au stress et les voies en aval associées aux dommages.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sod1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sod1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sod1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sod1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.