Plasmide CRISPR/Cas9 KO Superoxide Dismutase 1/SOD1 (m): sc-423069

Présentation

Sod1 code la superoxyde dismutase cytosolique Cu/Zn SOD1, une enzyme antioxydante majeure qui convertit l’anion superoxyde en peroxyde d’hydrogène et en oxygène afin de limiter les dommages oxydatifs. En modulant l’homéostasie rédox cellulaire, SOD1 influence la fonction mitochondriale, le contrôle de la qualité des protéines et des voies de signalisation sensibles au stress, notamment les programmes antioxydants médiés par NRF2. Une perturbation de l’activité de SOD1 modifie la susceptibilité au stress oxydatif, à la neuroinflammation et à la protéotoxicité, et le dysfonctionnement de SOD1 est largement utilisé comme point d’entrée mécanistique pour étudier la neurodégénérescence et les phénotypes associés des motoneurones. Dans les modèles murins, Sod1 constitue un système expérimental maniable reliant la gestion des espèces réactives de l’oxygène au métabolisme, aux lésions tissulaires liées au vieillissement et à la régulation transcriptionnelle sensible au rédox.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Superoxide Dismutase 1/SOD1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sod1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sod1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sod1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Superoxide Dismutase 1/SOD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sod1 pour l'étude de la signalisation de Superoxide Dismutase 1/SOD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sod1 essentiels à la fonction de Superoxide Dismutase 1/SOD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sod1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Superoxide Dismutase 1/SOD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Superoxide Dismutase 1/SOD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sod1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Superoxide Dismutase 1/SOD1 plasmide HDR (m) et le Superoxide Dismutase 1/SOD1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sod1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sod1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.