Plasmide CRISPR d'Activation (h) Superoxide Dismutase 1/SOD1: sc-400186-ACT

SOD1 code la superoxyde dismutase cytosolique Cu/Zn, qui catalyse la dismutation des anions superoxyde en peroxyde d’hydrogène et en oxygène, constituant une barrière enzymatique primaire contre les espèces réactives de l’oxygène. En modulant l’homéostasie rédox, SOD1 influence les réponses au stress oxydant, la fonction mitochondriale et les voies de signalisation en aval qui régulent l’inflammation, la protéostase et l’apoptose. Une activité altérée de SOD1 perturbe la capacité antioxydante cellulaire et peut contribuer au mauvais repliement des protéines et à la vulnérabilité des motoneurones, avec une forte pertinence pour la neurodégénérescence et, plus largement, pour des phénotypes associés au stress. SOD1 humaine est donc largement étudiée dans des modèles de déséquilibre rédox, de biologie de l’agrégation et de dysfonctionnement cellulaire lié aux dommages oxydatifs.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SOD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SOD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SOD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Superoxide Dismutase 1/SOD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SOD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Superoxide Dismutase 1/SOD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Superoxide Dismutase 1/SOD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SOD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.