Plasmide CRISPR/Cas9 KO SUN2 (h): sc-404746

Présentation

SUN2 code une protéine de la membrane nucléaire interne contenant un domaine SUN, qui constitue un composant central du complexe LINC (« linker of nucleoskeleton and cytoskeleton », lien entre nucléosquelette et cytosquelette). En se liant aux lamines nucléaires et en interagissant, à travers l’espace périnucléaire, avec des protéines à domaine KASH, SUN2 couple le noyau au cytosquelette d’actine afin de réguler le positionnement nucléaire, la mécanotransduction et la transmission des forces cytosquelettiques. SUN2 contribue à l’intégrité de l’enveloppe nucléaire, à l’organisation de la chromatine et aux réponses aux dommages de l’ADN, qui dépendent d’une connectivité nucleo‑cytosquelettique adéquate. La dérégulation des composants du complexe LINC, dont SUN2, a été associée à des phénotypes pertinents pour les laminopathies, la cardiomyopathie, les troubles musculaires et des modifications de l’architecture nucléaire associées au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SUN2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SUN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SUN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SUN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SUN2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SUN2 pour l'étude de la signalisation de SUN2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SUN2 essentiels à la fonction de SUN2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SUN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SUN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SUN2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SUN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SUN2 plasmide HDR (h) et le SUN2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SUN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SUN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.