Plasmide CRISPR d'Activation (h) SUMO-4: sc-403123-ACT

Le gène humain **SUMO4** code **SUMO‑4**, un petit modificateur de type ubiquitine qui régule la fonction des protéines par **SUMOylation**, influençant leur localisation subcellulaire, leur stabilité et leurs réseaux d’interaction. La modification post‑traductionnelle dépendante de SUMO‑4 a été associée à la signalisation en réponse au stress et à la modulation de programmes transcriptionnels, notamment des voies convergeant vers **NF‑κB** et la régulation de l’immunité innée. En ajustant la dynamique de la SUMOylation, SUMO‑4 peut affecter la protéostasie et les seuils de signalisation inflammatoire dans les tissus immunitaires et métaboliquement actifs. Les variations de **SUMO4** ont été étudiées dans le contexte de la biologie des maladies auto‑immunes et inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation immunitaire et des réponses cellulaires au stress.

SUMO-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SUMO4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SUMO-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SUMO4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SUMO4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SUMO-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SUMO4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SUMO-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SUMO-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SUMO4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.