Plasmide CRISPR/Cas9 KO SULT1C1 (m): sc-423200

Présentation

Sult1c1 code la sulfotransférase cytosolique SULT1C1, une enzyme de phase II du métabolisme des xénobiotiques qui transfère un sulfate du PAPS vers des substrats contenant des groupements hydroxyle ou amine. Cette réaction de sulfatation augmente généralement la solubilité aqueuse et module la bioactivité, le transport et l’élimination de petites molécules, contribuant ainsi à l’homéostasie chimique cellulaire. Dans les tissus murins, SULT1C1 participe à une détoxification coordonnée et à la signalisation métabolique aux côtés d’autres voies de conjugaison telles que la glucuronidation et la conjugaison au glutathion. Des altérations de l’activité des sulfotransférases ont été associées à des différences de sensibilité au stress chimique, à la prise en charge de composés perturbateurs endocriniens et à des réponses tissulaires liées à l’inflammation, faisant de Sult1c1 une cible utile pour les études mécanistiques en toxicologie et en métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SULT1C1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sult1c1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sult1c1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sult1c1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SULT1C1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sult1c1 pour l'étude de la signalisation de SULT1C1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sult1c1 essentiels à la fonction de SULT1C1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sult1c1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SULT1C1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SULT1C1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sult1c1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SULT1C1 plasmide HDR (m) et le SULT1C1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sult1c1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sult1c1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.