Particules Lentivirales d'Activation (h) SULT1A3/1A4: sc-417824-LAC

SULT1A3 code une sulfotransférase cytosolique qui catalyse la conjugaison au sulfate des catécholamines et d’autres monoamines apparentées, contribuant au métabolisme des xénobiotiques de phase II et à l’homéostasie des neurotransmetteurs. L’activité des protéines SULT1A3/1A4 régule la biotransformation et l’élimination des métabolites de la dopamine, de la noradrénaline et de la sérotonine, influençant l’équilibre rédox cellulaire et le flux de métabolites au sein des voies de sulfatation. Cette famille enzymatique est fortement exprimée dans certains tissus et peut moduler la signalisation locale en contrôlant la disponibilité des amines bioactives. Des altérations de l’expression ou de l’activité des sulfotransférases ont été étudiées dans le contexte de traits neuropsychiatriques, de la variabilité de la réponse pharmacologique et de la reprogrammation métabolique associée au cancer, où la capacité de sulfatation peut moduler la chimie du microenvironnement tumoral.

Les particules d'activation lentivirales SULT1A3/1A4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SULT1A3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SULT1A3/1A4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SULT1A3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SULT1A3/1A4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SULT1A3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.