SULT1A3/1A4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417824-LAC

SULT1A3 codifica una sulfotransferasi citosolica che catalizza la coniugazione con solfato di catecolamine e monoammine correlate, contribuendo al metabolismo di fase II degli xenobiotici e all’omeostasi dei neurotrasmettitori. L’attività proteica di SULT1A3/1A4 regola la biotrasformazione e la clearance dei metaboliti di dopamina, noradrenalina e serotonina, influenzando l’equilibrio redox cellulare e il flusso dei metaboliti attraverso le vie di solfatazione. Questa famiglia enzimatica è altamente espressa in tessuti selezionati e può modulare la segnalazione locale controllando la disponibilità di ammine bioattive. Alterazioni dell’espressione o dell’attività delle sulfotransferasi sono state studiate in relazione a tratti neuropsichiatrici, alla variabilità della risposta farmacologica e alla riprogrammazione metabolica associata al cancro, in cui la capacità di solfatazione può modificare la chimica del microambiente tumorale.

Le particelle di attivazione lentivirale SULT1A3/1A4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SULT1A3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SULT1A3/1A4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SULT1A3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SULT1A3/1A4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SULT1A3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.