Plasmide CRISPR/Cas9 KO SUGT1 (h): sc-405128

Présentation

SUGT1 (suppressor de l’allèle G2 de l’homologue de SKP1) est un co-chaperon conservé qui interagit avec HSP90 et participe à l’assemblage et à la stabilité de complexes multiprotéiques essentiels à la progression du cycle cellulaire. Il a été impliqué dans la fonction du kinétochore et le contrôle du point de contrôle mitotique, contribuant à une ségrégation fidèle des chromosomes et à la prolifération. SUGT1 participe également à la signalisation de l’immunité innée en modulant les voies dépendantes de NOD1/NOD2 et les réponses inflammatoires en aval via une formation régulée de complexes protéiques. Une expression ou une fonction dérégulée de SUGT1 a été associée, dans des systèmes modèles humains, à une protéostasie altérée, à des défauts du cycle cellulaire et à des phénotypes inflammatoires pertinents pour la biologie du cancer et les troubles liés à l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SUGT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SUGT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SUGT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SUGT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SUGT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SUGT1 pour l'étude de la signalisation de SUGT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SUGT1 essentiels à la fonction de SUGT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SUGT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SUGT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SUGT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SUGT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SUGT1 plasmide HDR (h) et le SUGT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SUGT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SUGT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.