Plasmide CRISPR d'Activation (h) SUGT1: sc-405128-ACT

SUGT1 (homologue de SGT1) code un co‑chaperon conservé qui couple l’activité de HSP90 à l’assemblage et à la stabilité de complexes multiprotéiques, notamment des composants du kinétochore nécessaires à une ségrégation fidèle des chromosomes. Dans les cellules humaines, SUGT1 soutient la progression du cycle cellulaire via le contrôle du point de contrôle mitotique et contribue au contrôle qualité lié au système ubiquitine‑protéasome en coordonnant la maturation des complexes protéiques. Par ces fonctions, SUGT1 est impliqué dans des voies qui régulent la stabilité du génome, l’aneuploïdie et les réseaux de signalisation sensibles au stress. Un dérèglement de la fonction ou de l’expression de SUGT1 a été étudié dans des contextes où le contrôle de la prolifération et la protéostasie sont altérés, offrant un point d’entrée mécanistique pour l’étude des défauts de division cellulaire et des phénotypes associés au cancer.

SUGT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SUGT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SUGT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SUGT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SUGT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SUGT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SUGT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SUGT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SUGT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SUGT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.