Plasmide CRISPR/Cas9 KO Su[fu] (m): sc-423973

Présentation

Suppressor of fused (Sufu) code la protéine Su(fu), un régulateur négatif majeur de la signalisation Hedgehog qui freine l’activité des facteurs de transcription GLI et contribue à contrôler les programmes transcriptionnels impliqués dans la mise en place des patrons embryonnaires, la spécification du destin cellulaire et l’homéostasie tissulaire. Dans les cellules murines, SUFU agit comme une plateforme cytoplasmique qui séquestre les protéines GLI et coordonne leur maturation et leur accès au noyau, en s’intégrant à la dynamique de la voie Hedgehog dépendante du cil primaire. La perturbation de Sufu peut modifier l’intensité de la voie et l’expression des gènes en aval, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la logique de la signalisation du développement et les phénotypes cellulaires induits par Hedgehog. Une altération de la fonction de SUFU a été associée à une dérégulation de la signalisation Hedgehog dans des modèles liés à des pathologies, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour l’exploration de la voie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Su[fu] (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sufu dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sufu, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sufu à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Su[fu].

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sufu pour l'étude de la signalisation de Su[fu], les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sufu essentiels à la fonction de Su[fu]
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sufu pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Su[fu] plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Su[fu] plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sufu. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Su[fu] plasmide HDR (m) et le Su[fu] (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sufu pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sufu définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.