Plasmide Double Nickase (h) Stim1: sc-401311-NIC

STIM1 (stromal interaction molecule 1) est un capteur de Ca2+ résidant dans le RE qui couple l’épuisement des réserves de calcium luminales à l’activation de l’entrée de calcium opérée par les stocks (SOCE) en recrutant les canaux ORAI aux jonctions RE–membrane plasmique. En régulant la dynamique du Ca2+ cytosolique, STIM1 coordonne des voies de signalisation en aval, notamment les programmes transcriptionnels calcineurine–NFAT, le remodelage du cytosquelette et le contrôle, dépendant du calcium, de la prolifération et de la sécrétion. La SOCE dépendante de STIM1 est au cœur de l’activation des cellules immunitaires et, plus largement, de la signalisation de réponse au stress, et des altérations de la fonction ou de l’expression de STIM1 ont été associées à des dysfonctionnements immunologiques, des myopathies et des phénotypes de signalisation calcique liés aux tumeurs. Ces propriétés font de STIM1 une cible largement utilisée pour disséquer les réseaux de signalisation calcique et les réponses transcriptionnelles couplées aux stimuli dans des modèles cellulaires humains.

Stim1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus STIM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de STIM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de STIM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de STIM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.