stefin A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423187

Übersicht

Stfa2 kodiert das Cystatin-Familienprotein Stefin A2 der Maus, einen zytosolischen Inhibitor papainähnlicher Cysteinproteasen wie etwa Cathepsinen. Durch die Begrenzung der Proteaseaktivität trägt Stefin A2 zur Regulation der intrazellulären Proteolyse, des lysosomalen und endolysosomalen Proteinumsatzes sowie zum Schutz vor proteasevermittelten Schäden unter Stress- und Entzündungsbedingungen bei. Ein verändertes Gleichgewicht zwischen Cysteinproteasen und ihren Inhibitoren ist für Signalwege relevant, die die Antigenprozessierung, die Aufrechterhaltung der epithelialen Barriere und das Gewebe-Remodeling steuern. Eine Dysregulation dieser Protease-Inhibitor-Achse wurde mit entzündlichen Phänotypen sowie krebsassoziierten Prozessen in Verbindung gebracht, bei denen die Cathepsinaktivität Invasion und das Remodeling der Mikroumgebung beeinflusst.

Das stefin A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stfa2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stfa2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stfa2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die stefin A2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stfa2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der stefin A2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Stfa2-Exone abzielen, die für die stefin A2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stfa2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom stefin A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom stefin A2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stfa2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das stefin A2 HDR-Plasmid (m) und stefin A2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stfa2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stfa2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.