Plásmido CRISPR de Activación (m) Stat1: sc-423174-ACT

El transductor de señales y activador de la transcripción 1 (Stat1) es un factor de transcripción central en la inmunidad innata y adaptativa del ratón que transmite señales aguas abajo de los interferones de tipo I, II y III. Tras la fosforilación mediada por JAK inducida por citocinas, STAT1 forma homo- o heterodímeros, se transloca al núcleo y se une a elementos GAS/ISRE para coordinar programas de expresión génica estimulados por interferón. Estas vías regulan la restricción antiviral, la presentación de antígenos, la polarización de macrófagos y el control del ciclo celular, vinculando la actividad de Stat1 con la señalización inflamatoria y la homeostasis inmunitaria. La señalización desregulada de STAT1 se utiliza ampliamente como un recurso mecanístico para estudiar la inflamación impulsada por infecciones, fenotipos tipo autoinmunidad en sistemas modelo y las interacciones tumor-inmunidad en investigación preclínica.

Stat1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Stat1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Stat1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Stat1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Stat1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Stat1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Stat1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Stat1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Stat1 en células tumorales con expresión de Stat1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.