Plasmide CRISPR d'Activation (m) STAMP2: sc-431182-ACT

Le gène murin *Steap4* code STAMP2, une métalloréductase à six domaines transmembranaires qui contribue au contrôle du statut rédox cellulaire en facilitant la réduction du fer ferrique et du cuivre cuivrique, et en coordonnant une signalisation dépendante des métaux. STAMP2 est induite par des signaux inflammatoires et métaboliques et a été associée à des voies qui régulent la fonction des adipocytes, la sensibilité à l’insuline et les réponses au stress déclenchées par les cytokines. Dans les tissus immunitaires et métaboliques, STAMP2 influence l’équilibre des espèces réactives de l’oxygène et l’homéostasie du réticulum endoplasmique, des processus qui modulent l’activation des macrophages et le remodelage du tissu adipeux. Une dérégulation de l’expression de *Steap4* a été associée à des états inflammatoires et à des dysfonctionnements métaboliques, ce qui en fait un point d’entrée pertinent pour étudier les interactions immuno‑métaboliques dans des modèles murins.

STAMP2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Steap4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

STAMP2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Steap4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Steap4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de STAMP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Steap4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de STAMP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie STAMP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Steap4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.