Plasmide CRISPR d'Activation (h) STAMBPL1: sc-405119-ACT

STAMBPL1 (STAM binding protein-like 1) code une déubiquitinase métalloprotéase au zinc de la famille JAMM, impliquée dans le tri endosomal et la régulation, dépendante de l’ubiquitine, du renouvellement des protéines membranaires. En modulant des événements de déubiquitination liés au trafic associé aux ESCRT, STAMBPL1 influence l’internalisation des récepteurs, l’atténuation des signaux et la protéostasie au sein des voies endolysosomales. Son activité relie la signalisation par l’ubiquitine à des réponses cellulaires telles que l’orientation du trafic des récepteurs aux facteurs de croissance, la dynamique de la signalisation inflammatoire et le remodelage adaptatif au stress du système endomembranaire. Une dérégulation de l’« édition » par l’ubiquitine et du trafic endosomal est largement impliquée dans la biologie des cancers, les neurodégénérescences et les dysfonctions immunitaires, faisant de STAMBPL1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques de ces processus.

STAMBPL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STAMBPL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

STAMBPL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STAMBPL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STAMBPL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de STAMBPL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STAMBPL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de STAMBPL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie STAMBPL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de STAMBPL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.