Plasmide CRISPR d'Activation (h) ST5: sc-411020-ACT

La protéine humaine ST5 (suppression of tumorigenicity 5) est codée par un gène qui produit une protéine adaptatrice multidomaine modulant la transduction des signaux intracellulaires ainsi que des processus associés au cytosquelette. Il a été rapporté que ST5 interagit avec des composants de la signalisation RAS/MAPK et d’autres voies sensibles aux facteurs de croissance, influençant, selon le contexte, la prolifération cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. Une expression altérée de ST5 ou un couplage anormal aux voies de signalisation a été observé dans plusieurs cadres de recherche liés au cancer et aux neurosciences, l’associant à une dérégulation de la signalisation mitogène et de l’homéostasie cellulaire. Par conséquent, ST5 est fréquemment étudiée pour son rôle dans l’intégration des signaux, la communication croisée entre voies (cross-talk) et la modulation des phénotypes dans des modèles cellulaires humains.

ST5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ST5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ST5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ST5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ST5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ST5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ST5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ST5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ST5 dans les cellules tumorales présentant une expression de ST5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.