Plasmide CRISPR/Cas9 KO SSTR5 (h): sc-404199

Présentation

Le récepteur de la somatostatine 5 (SSTR5) est un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) de la somatostatine qui se couple principalement aux protéines Gi/o afin d’inhiber l’activité de l’adénylyl cyclase, de réduire l’AMPc intracellulaire et de moduler la signalisation des canaux ioniques. Via des effets en aval sur MAPK/ERK et d’autres voies régulées par les RCPG, SSTR5 influence la sécrétion hormonale, la neurotransmission et les programmes de prolifération d’une manière dépendante du type cellulaire. Dans les tissus humains, SSTR5 contribue à la régulation endocrine et métabolique, notamment en modulant la signalisation de l’insuline et de l’axe de l’hormone de croissance. Une signalisation dérégulée des récepteurs de la somatostatine a été associée à des phénotypes sécrétoires altérés et à des comportements prolifératifs dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, ce qui fait de SSTR5 un nœud utile pour l’exploration des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SSTR5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SSTR5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SSTR5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SSTR5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SSTR5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SSTR5 pour l'étude de la signalisation de SSTR5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SSTR5 essentiels à la fonction de SSTR5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SSTR5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SSTR5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SSTR5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SSTR5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SSTR5 plasmide HDR (h) et le SSTR5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SSTR5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SSTR5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.