Plasmide CRISPR d'Activation (h) SSTR1: sc-403410-ACT

Le récepteur de la somatostatine 1 (SSTR1) est un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) associé à Gi/o, qui se lie aux peptides de la somatostatine afin de moduler l’activité de l’adénylate cyclase et de réduire l’AMPc intracellulaire, influençant ainsi la signalisation en aval de la PKA et les réponses transcriptionnelles. L’activation de SSTR1 peut également modifier la conductance des canaux ioniques et mobiliser, de manière dépendante du contexte, des nœuds de signalisation associés aux voies MAPK/ERK et PI3K, ce qui affecte les programmes d’excitabilité cellulaire, de sécrétion et de prolifération. Dans les tissus humains, SSTR1 contribue à la signalisation neuroendocrinienne et aux boucles de rétrocontrôle régulatrices au sein des circuits endocriniens et du système nerveux. Une dérégulation de la signalisation des récepteurs de la somatostatine a été étudiée en lien avec des altérations de la libération hormonale et du contrôle de la croissance dépendant des récepteurs dans des modèles pertinents pour la biologie des maladies neuroendocriniennes et neurologiques.

SSTR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SSTR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SSTR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SSTR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SSTR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SSTR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SSTR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SSTR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SSTR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SSTR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.