Plasmide CRISPR/Cas9 KO SSRP1 (h): sc-401780

Présentation

SSRP1 (structure specific recognition protein 1) est une sous-unité essentielle du complexe FACT de remodelage de la chromatine, qui facilite le désassemblage et le réassemblage des nucléosomes au cours de la transcription, de la réplication de l’ADN et de la réparation de l’ADN. En coordonnant l’activité de chaperon d’histones avec la progression de l’ARN polymérase II et la dynamique de la fourche de réplication, SSRP1 contribue au maintien de la stabilité du génome et régule l’accessibilité de la chromatine. Les processus dépendants de SSRP1 interfèrent avec le contrôle du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la régulation épigénétique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du stress réplicatif et des programmes transcriptionnels aberrants. Une activité dérégulée de FACT/SSRP1 a été impliquée dans des états de chromatine oncogéniques et une capacité proliférative altérée, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique en biologie du cancer et en recherche sur le maintien du génome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SSRP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SSRP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SSRP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SSRP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SSRP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SSRP1 pour l'étude de la signalisation de SSRP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SSRP1 essentiels à la fonction de SSRP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SSRP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SSRP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SSRP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SSRP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SSRP1 plasmide HDR (h) et le SSRP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SSRP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SSRP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.