Particules Lentivirales d'Activation (h) SRPK1: sc-402855-LAC

La SRPK1 humaine (serine/arginine-rich protein-specific kinase 1) est une kinase sérine/thréonine conservée qui phosphoryle les facteurs d’épissage SR, coordonnant l’assemblage du spliceosome et régulant l’épissage alternatif des pré-ARNm. En contrôlant le trafic nucléocytoplasmique dépendant de la phosphorylation ainsi que l’activité des régulateurs de l’épissage, SRPK1 intègre des signaux de signalisation avec des programmes de maturation de l’ARN qui influencent la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et la fidélité de l’expression génique. Une activité altérée de SRPK1 et des profils de phosphorylation des protéines SR ont été associés à des réseaux d’épissage dérégulés observés en cancérologie, dans la signalisation angiogénique et dans des phénotypes de traitement de l’ARN pertinents pour la neurodégénérescence. En tant que nœud de voie reliant la signalisation par kinases à la sélection des isoformes de transcrits, SRPK1 est fréquemment étudiée dans les mécanismes de contrôle de l’épissage, la phosphorégulation protéomique et la génomique fonctionnelle résolue par isoforme.

Les particules d'activation lentivirales SRPK1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SRPK1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SRPK1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SRPK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SRPK1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SRPK1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.