Plasmide CRISPR/Cas9 KO SRPK1 (m): sc-423158

Présentation

Le gène murin *Srpk1* code la kinase 1 spécifique des protéines riches en sérine/arginine (SRPK1), un régulateur clé de l’épissage des pré-ARNm via la phosphorylation des protéines SR, telles que les facteurs SRSF, influençant leur localisation nucléaire et l’assemblage du spliceosome. En couplant des signaux de signalisation aux décisions d’épissage alternatif, SRPK1 modifie des programmes d’expression génique qui gouvernent la prolifération, les réponses au stress et la différenciation. L’activité de SRPK1 s’inscrit à l’interface de réseaux de maturation de l’ARN liés au contrôle du cycle cellulaire et à la régulation post‑transcriptionnelle, ce qui la rend pertinente pour l’étude des dérégulations de l’épissage observées dans le cancer, les maladies neurodégénératives et les contextes inflammatoires. Dans les systèmes murins, la perturbation de SRPK1 est couramment utilisée pour analyser comment la signalisation des kinases de l’épissage façonne des isoformes de transcrits spécifiques des tissus et les phénotypes en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SRPK1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Srpk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Srpk1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Srpk1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SRPK1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Srpk1 pour l'étude de la signalisation de SRPK1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Srpk1 essentiels à la fonction de SRPK1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Srpk1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SRPK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SRPK1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Srpk1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SRPK1 plasmide HDR (m) et le SRPK1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Srpk1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Srpk1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.