Plasmide CRISPR d'Activation (m) SRPK1: sc-423158-ACT

Le gène murin *Srpk1* code la sérine/arginine-rich protein-specific kinase 1 (SRPK1), un régulateur clé de l’épissage du pré-ARNm via la phosphorylation des facteurs d’épissage SR et la modulation de l’assemblage du spliceosome. SRPK1 influence la maturation de l’ARNm, la navette nucléo-cytoplasmique des régulateurs de l’épissage, ainsi que des programmes d’isoformes de transcrits en aval qui affectent le contrôle du cycle cellulaire, les réponses au stress et la différenciation. Une activité altérée de SRPK1 a été associée à des dérégulations des profils d’épissage de l’ARN observées dans des contextes de biologie du cancer, de neurodégénérescence et de signalisation inflammatoire. Ces propriétés font de SRPK1 un nœud pertinent pour étudier le remodelage des voies dépendant de l’épissage et les réseaux d’expression génique dans les systèmes mammifères.

SRPK1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Srpk1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SRPK1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Srpk1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Srpk1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SRPK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Srpk1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SRPK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SRPK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Srpk1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.