SRPK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423158-ACT

O gene Srpk1 de camundongo codifica a quinase 1 específica para proteínas ricas em serina/arginina (SRPK1), um regulador-chave do splicing de pré-mRNA por meio da fosforilação de fatores de splicing SR e da modulação da montagem do spliceossomo. A SRPK1 influencia o processamento de mRNA, o transporte núcleo–citoplasma de reguladores de splicing e programas de isoformas de transcritos a jusante que afetam o controle do ciclo celular, respostas ao estresse e diferenciação. A atividade alterada de SRPK1 tem sido associada a padrões desregulados de splicing de RNA observados em contextos de biologia do câncer, neurodegeneração e sinalização inflamatória. Essas propriedades tornam a SRPK1 um alvo útil para investigar a remodelação de vias dependente de splicing e redes de expressão gênica em sistemas de mamíferos.

SRPK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Srpk1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SRPK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Srpk1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Srpk1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SRPK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Srpk1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SRPK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SRPK1 em células tumorais com expressão de Srpk1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.