SRp55 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401621-ACT

SRSF6 codifica o fator humano de splicing rico em serina/arginina SRp55, uma proteína de ligação a RNA que acopla a seleção de sítios de splicing ao processamento co-transcricional de RNA e à exportação de mRNA. O SRp55 participa da montagem do spliceossomo e regula decisões de splicing alternativo que moldam programas de expressão de isoformas que controlam proliferação, diferenciação e respostas ao estresse. Por meio da modulação da inclusão de éxons e da arquitetura éxon–íntron, o SRSF6 influencia vias a jusante, incluindo progressão do ciclo celular, apoptose e redes de transdução de sinais sensíveis ao equilíbrio de isoformas de transcritos. A expressão ou atividade desregulada de SRSF6 tem sido associada na literatura a padrões aberrantes de splicing observados em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar fenótipos impulsionados por splicing em células humanas.

SRp55 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SRSF6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SRp55 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SRSF6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SRSF6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SRp55. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SRSF6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SRp55 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SRp55 em células tumorais com expressão de SRSF6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.