Plásmido CRISPR de Activación (h) SRp40: sc-401886-ACT

El SRSF5 humano codifica el factor de empalme SRp40, una proteína de unión a ARN rica en serina/arginina que regula el empalme constitutivo y alternativo del pre-ARNm e influye en la definición de exones mediante interacciones con potenciadores exónicos del empalme. SRp40 contribuye a redes de procesamiento de ARN que acoplan el empalme con la transcripción y la exportación de ARNm, determinando la elección de isoformas en vías que controlan la progresión del ciclo celular, la apoptosis y las respuestas al estrés. La actividad o expresión alterada de SRSF5 puede desplazar el equilibrio de isoformas de empalme y se ha asociado con una desregulación del metabolismo del ARN observada en múltiples contextos de enfermedad, incluidas la señalización relacionada con el cáncer y fenotipos proliferativos. Como nodo en la regulación del espliceosoma mediada por proteínas SR, SRp40 se estudia con frecuencia por su impacto en la remodelación del transcriptoma y la diversidad del proteoma.

SRp40 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SRSF5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SRp40 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SRSF5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SRSF5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SRp40. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SRSF5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SRp40 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SRp40 en células tumorales con expresión de SRSF5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.